1983年,trounson报道使用冷冻保存和融解的人类胚胎移植首例妊娠成功。此后冷冻保存胚胎用于辅助生育技术得以推广。1987年之前3577个胚胎用各种方法冷冻保存融解、移植,大约50%(1794个)融解后有存活力,其中1119个进行了胚胎移植。结果163例获得妊娠(13.4%),其中自然流产占26%,宫外孕4%,此外2例宫内及临产时诊断胎儿畸形。
首例活产的人类胚胎是用了不同于目前广泛使用的冷冻保存法。此例胚胎系用1.5mol/l的dmso冷冻保存。在室温中将冷冻保存液浓度每隔10min逐步增加。在培养液(pbs)中,dmso的初始浓度为0.25mol/l,以后则逐步增加到0.5、1.0和1.5mol/l浓度。dmso浓度达到1.5mol/l后,培养剂中的胚胎以2℃/min的速率从室温冷却到-6℃,然后进行人工种植并在-6℃保持30min。试管再以0.3℃/min速率冷却到-80℃,然后放入液氮内(-196℃)贮存。在融解时试管中胚胎从液氮中转移到-80℃控制箱,再以8℃/min速率融解到+4℃。将dmso逆向稀释。应用上述方法冻融处于4-细胞或8-细胞发育阶段的胚胎,则68/136胚胎存活,其半数或多一些卵裂球保持完好。68个胚胎移植到45个患者中后结果导致9例临床妊娠。
一、用dmso冷冻保存胚胎的方法
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