（1）在室温下加入0.5mol/lproh，每隔10min递增0.5mol/l，直到1.5mol/l。
（2）胚胎放入管中，在hepes-htf培养液内加入蔗糖，浓度为0.2mol/l。
（3）胚胎以2℃/min速率冷却到-7℃。
（4）在-7℃下种植及维持10min。
（5）胚胎以0.3℃/min速率冷却到-30℃。
（6）投入液氮内。
最近cohen等还报道47个胚胎移植周期应用proh冷冻液，结果12个妊娠，并认为适时融解和移植胚胎是提高临床效果的重要因素。有关资料证实胚胎融解要与自然周期同步。换言之，移植周期中lh峰提示开始排卵。在自然周期排卵后3h内应同步融解胚胎。如果这种同步融解步骤超过了3h妊娠均未成功。如果采卵周期中于排卵前12h内采卵，而移植的胚胎也在排卵前12h内融解，则妊娠率最高。在有的单位proh最常用于早期胚胎冷冻，少数允许继续生长成囊胚的胚胎则用甘油作为冷冻液。用这种胚胎选择冷冻法，若胚胎在2-细胞期或4-细胞期未能确定其是否正常，可允许发育到囊胚形成，如它们能达到这个发育期，胚胎就可进行冷冻保存。目前认为如果胚胎显示正常发育，则胚胎应尽早冷冻保存。胚胎在体外培养的环境内时间越短，临床效果越佳。但是在某些情况下，若胚胎发育不规则，在冷冻前可让其发育到囊胚期，以证实冷冻胚胎是存活的。trounson与siobiom最近报道了超速冷冻人类胚胎的可行性。用于放置胚胎的dolbecco磷酸盐缓冲液，含有3mol/l的dmso与0.25mol/l的蔗糖，并放在冷冻管内，管子是密封的，将胚胎于室温下置于含上述dmso溶液的管子中持续3min，然后直接投入-196℃液氮中。胚胎融解时则直接从液氮移到37℃水浴。超速冷冻的22例胚胎中18例完好存活。
